Ekstrak Buah Delima Adalah Ejen Aktiviti Antitumor Dan Anti-metastasis Yang Kuat Dalam Kanser Tiroid

Ekstrak Buah Delima Ejen Aktiviti Antitumor Dan Anti-metastasis Yang Kuat Dalam Kanser Tiroid

ABSTRAK

Kes karsinoma tiroid telah semakin meningkat di seluruh dunia dalam tempoh sepuluh tahun yang lalu. Walau bagaimanapun, kaedah rawatan kes karsinoma tiroid tiada pendekatan baru dan berkesan ditemui sehingga ini. Dalam kajian ini, ekstrak kulit buah delima (PoPx) dinilai untuk aktiviti antikansernya terhadap karsinoma thyroid in vitro dan in vivo. ekstrak kulit buah delima (PoPx) dengan kuat menghalang percambahan dalam dua jenis sel sel kanser tiroid dan apoptosis sel. Ekstrak kulit buah delima (PoPx) juga boleh mengurangkan potensi membran mitokondria (ΔΨm), yang menunjukkan bahawa ekstrak kulit buah delima(PoPx) boleh menyebabkan apoptosis melalui laluan apoptotik yang dimediasi mitokondria.

Di samping itu, ekstrak kulit buah delima (PoPx) telah menjejaskan penghijrahan sel kanser tiroid dan pencerobohan oleh pengaturcapan bawah metrikoproteinase-9 matriks (MMP-9). Lebih penting lagi, ekstrak kulit buah delima (PoPx) secara signifikan menghalang pertumbuhan tumor dalam model tikus BCPAP dengan mengurangkan penularan sel dan mendorong apoptosis. Penemuan ini menunjukkan bahawa ekstrak kulit buah delima (PoPx) boleh menjadi ejen fitokimia yang berkesan.

PENGENALAN

Sebagai salah satu unsur malignancies endokrin yang paling biasa, peningkatan kanser tiroid di dunia telah mendapat perhatian ramai. ¹ Kira-kira 95% daripada kanser tiroid berasal dari sel epitelium folikular tiroid, termasuk karsinoma tiroid papillary (PTC, 80%), folikel Karsinoma tiroid (FTC, 10-15%), kanser tiroid yang tidak dapat dibezakan (PDTC) dan kanser tiroid anaplastik (ATC, 1-2%). ³ Kadar kanser tiroid adalah lebih tinggi daripada tumor malignan yang lain, terutamanya PTC . Walau bagaimanapun, kes berulang dan kematian masih menjadi cabaran untuk rawatan kanser tiroid. Rawatan konvensional terhadap kanser tiroid merangkumi pembedahan, terapi radio postoperative, rawatan penindasan hormon tiroid (TSH) dan perencat kinase berbilang molekul kecil (MKI), yang muncul sebagai pilihan baru untuk kanser tiroid.⁴ Sebagai rawatan utama untuk Kanser tiroid, pembedahan menjejaskan kualiti hidup pesakit, dengan banyak komplikasi selepas bersalin.

Rawatan iodin radioaktif pasca operasi boleh memusnahkan sisa tumor tiroid atau metastasis dan menghapuskan sisa tisu tumor tiroid, tetapi kesan pengambilannya bergantung kepada kadar pengambilan I131, yang menghadkan penggunaannya. Ia memberi manfaat kepada pesakit untuk mengekalkan tahap TSH yang rendah selepas pembedahan untuk mengurangkan kanser berulang dan memanjangkan hayat, tetapi subklinikal hipertiroidisme yang disebabkan oleh penindasan TSH jangka panjang juga mempunyai kesan sampingan pada sistem kardiovaskular, sistem rangka dan aspek lain.^5,6 Walau bagaimanapun, keberkesanan dan keselamatan dadah yang disasarkan masih perlukan penyelidikan lanjut. Oleh itu, perlu mencari cara baru untuk mencegah dan merawat kanser tiroid.

⁷ Perubatan Tradisional Cina (TCM) mempunyai nilai berharga dalam pencegahan penyakit dan penjagaan kesihatan. ^8–12 Tahun-tahun kebelakangan ini, delima sebagai ubat semulajadi dan makanan kesihatan telah digunakan secara meluas di seluruh dunia. Penyelidikan berterusan tentang bioaktiviti delima telah secara beransur-ansur menarik perhatian penyelidik.^13–15 Telah dilaporkan bahawa ekstrak kulit delima (PoPx) mempunyai pelbagai bioaktiviti dalam mengawal paras glukosa darah, ¹⁶ ketahanan pengoksidaan, ¹⁷ anti-bakteria, ¹⁸ dan lain-lain. ^19,20 Beberapa kajian telah menunjukkan bahawa ekstrak kulit delima (PoPx) menghalang pertumbuhan tumor dalam kanser prostat, ²¹ kanser kolon, ²² kanser kulit²³ dan kanser payudara²⁴ dengan mendorong apoptosis sel.

Walau bagaimanapun, kesan ekstrak kulit delima (PoPx) terhadap kanser tiroid belum dilaporkan, dan penyelidikan lanjut diperlukan untuk menggambarkan mekanisme ekstrak kulit buah delima(PoPx) . Untuk memberikan evidence untuk penggunaan secara meluas ekstrak kulit delima (PoPx) dalam pencegahan dan rawatan kanser tiroid, kesan ekstrak kulit buah delima(PoPx) dinilai pada sel karsinoma tiroid BCPAP dan TPC-1 dan mekanisme molekul awal diterokai dalam kajian kami ini.

BAHAN DAN KAEDAH

Penyediaan ekstrak kulit buah delima(PoPx)

Kelompok buah delima berasal dari Tunisia diperolehi daripada Yuzhuang Ecological Green Industry Co. (Qianxi County, Wilayah Guizhou, China). Penyediaan ekstrak kulit buah delima yang dirujuk kepada kaedah yang telah dijelaskan sebelumnya dengan pengubahsuaian kecil.25 Kulit delima segar (400 g) dipotong menjadi kepingan 0.5 cm dan diekstrak dengan gabungan etanol (1550 mL) dan H2O (480 mL) seterusnya direndam selama 2 jam pada suhu 60° C. Kemudian ekstrak mentah ditapis dan disimpan di bawah vakum; Pepejal serbuk coklat 45 gram akhirnya dikumpulkan. ekstrak kulit delima (PoPx) disimpan pada suh i -20 ° C dan dilindungi dari cahaya sebelum digunakan. Reagent dan antibodi 3-amino-3-imino-3H-xanthen-9-yl) metil ester (Rh123) dan 2 ‘, 7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) dibeli dari Sigma Chemical Co. (St Louis, MO, Amerika Syarikat). Hoechst 33258 dibeli dari Beyotime (Beijing, China).

Kit Annexin V-FITC Pengesanan Apoptosis telah dibeli dari KeyGen Biotech (Nanjing, China). Untuk eksperimen blot barat, antibodi utama terhadap matriks metalloproteinase-9 (MMP-9), Bax dan β-actin dibeli daripada Teknologi Tanda Isyarat Cell (Beverly, MA, Amerika Syarikat) dan antibodi kedua telah dibeli dari ZSGB-BIO Co. (Beijing , China). Untuk kajian immunohistokimia, antibodi primer terhadap caspase-3 (CC-3) dan matriks metalloproteinase-9 (MMP-9) telah dibeli daripada Technology Signaling Cell (Beverly, MA, U.S.A.). Mouse monoclonal anti Ki-67 dibeli dari Merck-Millipore. Kit Pengesanan DAB adalah dari ZSGB-BIO Co. (Beijing, China). Untuk in vitro assays, PoPx telah disediakan sebagai penyelesaian stok 200 mg mL-1 di DMSO dan disimpan pada -20° C. Maka penyelesaian stok dicairkan dalam medium ujian yang relevan, dan 0.1% DMSO berkhidmat sebagai ejen penghantaran kawalan. Untuk kajian vivo, PoPx telah disediakan dalam saline normal dan dosis pada 125 mg kg-1 dan 62.5 mg kg-1 berat badan. Kromatografi cecair prestasi tinggi (HPLC) dan spectrography massa (MS) A Waters 2695 Sistem HPLC (Waters Corp, Milford, Massachusetts, U.S.A.) telah digunakan dalam eksperimen ini.

Kaedah dan syarat kromatografi yang dirujuk kepada kaedah yang diterangkan sebelumnya. ²⁶Data telah diproses oleh perisian Waters Empower 3. Pemisahan kromatografi dilakukan pada jalur Waters Symmetry C18 (5 μm, 4.6 × 250 mm). Fasa mudah alih terdiri daripada air deionized dengan asid asetik glasial (A; 99 [ruang nipis (1/6-em)]: [ruang nipis (1/6-em)] 1, v / v; pH 3.0) dan metanol B) dengan kadar aliran 1 mL min-1. Program kecerunan ditetapkan seperti berikut: 0-70 min, 10-45% B; 70-80 min, 45% B. Kromatogram dikesan pada panjang gelombang 256 nm sepanjang ujian. Sebuah Absciex Qtrap 5500 digunakan dalam MS. Kami mengesan sampel menggunakan HPLC dan MS selepas menetapkan keluk kerja standard asid ellagic (EA) dan punicalagin (PC).

Latarbelakang sel

Rangkaian sel barah kardiovaskular human papillary BCPAP (melindungi mutasi BRAF V600E) diperoleh dari University of Medicine Lyon-Sud and TPC-1 (yang menyelenggarakan penyusunan RET-PTC) dari Institut Penyelidikan Interdisipliner. Nthy-ori 3-1 (sel epitelium folikular tiroid manusia) diperoleh daripada the Health Protection Agency Culture Collection. Sel-sel sel normal manusia lain yang digunakan dalam kajian kami diperolehi dari American Type Culture Collection. Sel-sel telah disebarkan dalam medium RPIM 1640 atau DMEM yang mengandungi 10% serum janin lembu (FBS) dan 1% antibiotik (penicillin dan streptomycin) dalam 5% CO2 pada suhu 37° C.

Ujian daya tahan sel

Daya tahan sel sel kanser terapi ekstrak kulit buah delima (PoPx) dinilai oleh ujian MTT. Secara ringkas, sel-sel yang berkembang dengan pesat (2-6 x 103 sel setiap plot ujian) dilapisi dalam plat 96-sum (100 μL per plot) dan diinkubasi selama 24 jam. Kemudian sel-sel telah dirawat dengan kepekatan yang berbeza dari ekstrak kulit buah delima (PoPx) (0, 12.5, 25, 50, 100, 200 μg mL-1). Setelah rawatan selama 24 jam, 48 jam dan 72 jam, masing-masing, 20 μL 5 mg mL-1 MTT ditambah kepada setiap plot, dan plat diinkubasi pada suhu 37 ° C untuk 2-4 jam. Medium kemudiannya dikeluarkan, dan precipitates berwarna ungu disediakan dalam 150 μL DMSO. Penyerapan warna dicatatkan pada 492 nm menggunakan spektrofotometer mikropemproses MAX M5 Spectra (Peranti Molekul, CA, U.S.A.). Di samping itu, ujian 72T MTT dilakukan pada HEK293 (sel ginjal embrio manusia) dan LO2 (sel normal hati manusia). Sementara itu, 24 jam, 48 jam dan 72 jam ujian MTT juga dilakukan pada Nthy-ori 3-1 (sel sel epitelium folikel tiroid) untuk menguji sitotoksisiti ekstrak kulit buah delima (PoPx) . Data yang ditunjukkan mewakili purata tiga eksperimen bebas.

Pembentukan koloni

Ujian pembentukan koloni diukur seperti yang telah dijelaskan sebelumnya. ²⁷ Secara ringkas, sel-sel BCPAP dan TPC-1 telah dibinakan dengan bilangan sel tertentu (2000 sel setiap plot) dalam plat 6-plot. Setelah pengeraman 24 jam, sel-sel telah dirawat dengan kepekatan ekstrak kulit buah delima (PoPx) yang ditetapkan (0, 12.5, 25, 50, 100, 200 μg mL-1) dan kemudian diinkubasi untuk 10 hari. Kemudian sel-sel telah diadunkan dengan metanol dan dirwarnakan dengan kristal violet 0.5% selama kira-kira 15 minit dan koloni (> 50 sel) dikira di bawah mikroskop. Data yang ditunjukkan mewakili purata tiga eksperimen bebas.

Analisis morfologi nukleus oleh pewarnaan Hoechst

Suatu sel apoptosis mempunyai ciri-ciri morfologi yang berbeza: pengecutan badan sel, pemeluwapan kromatin dan penyatuan apoptotik yang muncul. ²⁸ Untuk mengenal pasti sama ada pengurangan apoptosis disebabkan oleh ekstrak kulit buah delima (PoPx) , kami menanda sel-sel BCPAP dan TPC-1 dengan Hoechst 33258 dengan pewarna. Ringkasnya, sel-sel BCPAP dan TPC-1 (1-2 × 105 sel bagi setiap telaga) disalut ke pelindung 18 mm dalam plat 6-telaga selama 24 jam setiap satu. Setelah rawatan dengan kepekatan yang berlainan (0, 12.5, 25, 50, 100, 200 μg mL-1) PoPx untuk 48 jam, sel-sel dibersihkan dengan saline-buffered buffered fosfat (PBS) dua kali dan ditetapkan dalam metanol selama 15 minit. Sel-sel telah diwarnai dengan kaedah Hoechst 33258 mengikut arahan pengilang. Kemudian morfologi nuklear sel apoptosis difoto di bawah mikroskop pendarfluor (Leica, DM4000B).

Analisis apoptosis oleh sitometri aliran (FCM)

Untuk mengesahkan lagi induksi apoptosis oleh ekstrak kulit buah delima (PoPx), kit pengesanan apoptosis Annexin V-FITC digunakan seperti yang dijelaskan sebelum ini. ²⁹ Ringkasnya, sel-sel (1-2 × 105 sel setiap telaga) telah dijadikan benih dalam plat 6-baik dan dirawat dengan ekstrak kulit buah delima(PoPx) ( 0, 12.5, 25, 50, 100, 200 μg mL-1) selama 48 jam. Kemudian sel-sel diambil dan dibersihkan dua kali dengan PBS yang sejuk. Tahap apoptosis dikesan oleh FCM menggunakan kit pengesanan apoptosis dan merujuk kepada arahan pengeluar. Data dianalisis dengan perisian FlowJo. Data yang ditunjukkan mewakili purata tiga eksperimen bebas.

Pengesanan potensi membran mitokondria (Ψm) dan spesies oksigen reaktif (ROS)

Ujian potensi membran mitokondria dilakukan seperti yang dilaporkan sebelum ini dan diperiksa oleh FCM dengan menggunakan Rh123 pewarnaan. ³⁰ Sel-sel telah dirawat dengan dosis yang ditunjukkan oleh PoPx (0, 12.5, 25, 50, 100, 200 μg mL-1) selama 48 jam dan kemudian diinkubasi dengan 10 μM Rh123 pada suhu 37° C dalam gelap selama kira-kira 30 minit. Sel-sel yang berwarna kemudian dibasuh dengan PBS sejuk dua kali, dan kemudian Rh123 pendarfluor dikesan oleh FCM. Untuk pengesanan ROS intraselular, ³¹ sel telah dirawat dengan kepekatan PoPx (0, 12.5, 25, 50, 100, 200 μg mL-1) selama 48 jam dan kemudian diinkubasi dengan 10 μM DCFH-DA yang diencerkan dalam PBS pada suhu 37 ° C selama 30 minit. Sel-sel yang berwarna kemudian dibasuh dengan PBS yang sejuk dan dianalisis oleh FCM. Data yang ditunjukkan mewakili purata tiga eksperimen bebas. Penghijrahan ruang Boyden dan serangan pencerobohan Satu pengujian migrasi kebuk Boyden (8μm saiz pori) dijalankan seperti yang digambarkan sebelum ini, dengan beberapa pengubahsuaian.

³² Ringkasnya, sejumlah 1.5 × 105 sel (untuk BCPAP) atau 1 × 105 sel (untuk TPC-1) dalam 100 μL Medium bebas serum telah dimasukkan ke dalam ruang atas 24 plat baik transwell (Millipore), dan medium 600 μL yang mengandungi 10% FBS ditambah di bahagian bawah. Kepekatan yang berbeza dari ekstrak kulit buah delima(PoPx) (0, 25, 100, 200 μg mL-1) telah ditambahkan ke dalam kedua-dua bekas. Sel dibenarkan untuk berhijrah selama kira-kira 48 jam dan sel tidak bermigrasi dimusnahkan. Kemudian sel yang berhijrah mematuhi permukaan bawah membran transwell telah dimasukkan dalam metanol dan diwarnakan dengan kristal violet 0.5%. Sel bermigrasi dalam 3 bahagian dipilih secara rawak dikira dan difoto di bawah mikroskop cahaya. Serangan invasi ditentukan berdasarkan kajian terdahulu. ³³ Ringkasnya, permukaan atas membran transwell ditutup dengan Matrigel (1 ruang nipis (1/6-em)]: [ruang nipis (1/6-em)] 3, 60 μL per telaga, BD Biosciences, Amerika Syarikat) yang dicairkan oleh medium bebas serum dan ruang bawah kebuk dipenuhi dengan medium 600 μL yang mengandungi 10% FBS. Sedang 1.5 × 105 sel (untuk BCPAP) atau 1 × 105 sel (untuk TPC-1) dalam 100 μL medium serum bebas diletakkan di bahagian atas setiap transwell dan dirawat dengan kepekatan ekstrak kulit buah delima(PoPx) yang ditetapkan (0, 25, 100, 200 μg mL-1).

Selepas inkubasi selama 48 jam, sel-sel yang terletak di bahagian atas penuras telah dikeluarkan dan mereka yang di bahagian bawahnya tetap dengan metanol dan pewarna kristal violet 0.5%. Kemudian, sel-sel yang bermigrasi juga dikira dan difoto di bawah mikroskop cahaya. Hasilnya dinyatakan sebagai peratusan kadar penghijrahan berbanding dengan kumpulan kawalan.

Western blot analysis

Untuk menentukan kesan ekstrak kulit buah delima(PoPx) pada jalur isyarat yang terlibat, beberapa protein dalam sel BCPAP dinilai oleh blot analysis. Western blot analysis dilakukan seperti yang diterangkan sebelumnya, ³⁴ dengan pengubahsuaian kecil. Secara ringkas, sel BCPAP dirawat dengan ekstrak kulit buah delima (PoPx) dalam kepekatan yang berlainan (0, 25, 100, 200 μg mL-1) selama 48 jam; maka sel-sel dibasuh dua kali dengan PBS yang sejuk dan dilepaskan dalam penyangga RIPA. Setelah sel lysates telah disentrifugasi pada 13300rpm pada 4° C selama 15 minit, supernatan itu diperolehi. Kepekatan protein ekstraktif diukur menggunakan kaedah G-250 biru Coomassie yang cemerlang dan menyamakan kedudukan sebelum dimuatkan. Jumlah protein yang sama dari setiap sampel dikenakan gel elektroforesis gel SDS-PAGE, berikutan pemindahan ke membran polyvinylidene difluoride (PVDF) (Amersham Bioscience, Piscataway, N.J.). Kemudian, membran telah dicampur dengan susu skim 5% pada suhu 37 ° C selama 2 jam dan diinkubasi dengan antibodi primer yang luar biasa pada 4° C. Selepas pengeraman dengan antibodi yang berkaitan, kumpulan reaktif telah dikenalpasti menggunakan kit chemiluminescence yang dipertingkatkan (Amersham Bioscience, Piscataway, N.J.).

Tumor Xenograft dalam tikus

Semua eksperimen haiwan telah diluluskan oleh Jawatankuasa Penjagaan dan Rawatan Haiwan Institutional Animal Care and Treatment Committee of Sichuan University di China (Nombor Permit: 20151109-2) dan telah dijalankan mengikut garis panduan yang diluluskan. Tikus BALB / c betina (umur 5-6 minggu) diperoleh dari Pusat Haiwan Makmal Universiti Sichuan (Chengdu, China). Selepas tikus BALB / c athymic betina telah disesuaikan dengan persekitaran selama seminggu, mereka telah bahagikan kepada tiga kumpulan (8 tikus per kumpulan), dan menerima pentadbiran intragastric (ig) ekstrak kulit buah delima (PoPx) x 125 mg kg-1, 62.5 mg kg-1, sekali setiap hari selama 6 hari. Kemudian kita memasukkan tikus dengan sel BCPAP (2.0 × 106 sel per 120 μL setiap satu). Selepas implantasi sel ectopic subkutaneus, rawatan dihentikan selama 7 hari dan kemudian berterusan selama 18 hari. Jumlah tumor dan berat badan diukur setiap tiga hari. Saiz tumor dikira mengikut formula: jumlah tumor (mm3) = 0.52 × L × W2 di mana L adalah panjang dan W adalah lebar.

Pada akhir eksperimen (pada hari ke-31), semua haiwan telah keluarkan serviks. Tumor dan organ dalaman, seperti hati, hati, limpa, paru-paru dan buah pinggang, telah dikeluarkan dari haiwan. Tisu-tisu ini (tumor dan organ dalaman) dikenakan formalin, tertanam di parafin, dipotong menjadi 4 μm bahagian, kering, dan disimpan pada suhu bilik. Pewarnaan imunohistokimia (IHC) seperti yang telah dijelaskan sebelumnya. ³⁵Sekumpulan tumor tertakluk kepada pengambilan antigen, disekat dengan serum, diinkubasi dengan antibodi utama (CC-3, Ki-67 dan MMP-9), kemudian diwarnai dengan Kit Pengesanan DAB. Selain itu, untuk menilai kesan ekstrak kulit buah delima (PoPx) terhadap kerosakan organ visceral kepada haiwan, kami melakukan hematoxylin dan eosin (H & E) yang mengotorkan bahagian-bahagian tisu (jantung, hati, limpa, paru-paru dan buah pinggang). Imej diambil dengan mikroskop Leica (Leica, DM4000B).

Analisis statistik

Eksperimen berasaskan latarbelakang sel telah dilakukan dalam sekurang-kurangnya tiga kali ganda biologi. Pengiraan pengubahan dilakukan pada bahagian dalam sekurang-kurangnya tiga keadaan yang berbeza. Data diwakili sebagai sarana ± SD. Ujian t-2 yang digunakan untuk analisis statistik dan nilai p statistik yang signifikan dilabelkan sebagai berikut: * p <0.05; ** p <0.01; *** p <0.001.

KEPUTUSAN

Kandungan dan berat molekul punicalagin dan asid ellagik dalam PoPx

Analisis regresi linear untuk punicalagin (PC) dan asid ellagic (EA) dinyatakan dengan merancang kawasan puncak (y) terhadap kepekatan (x, μg mL-1) penyelesaian piawai, seperti yang ditunjukkan dalam Table 1. Semua analitik yang tinggi linier dalam julat yang diselidiki. Sampel ekstrak kulit buah delima (PoPx) dianalisis dengan menggunakan kaedah HPLC yang dioptimumkan dan dipadankan dengan Similarity Evaluation System for Chromatographic Fingerprint of Traditional Chinese Medicine (Versi 2012A).

Komponen dikenal pasti sebagai PC (puncak 1 dan puncak 2) dan EA (puncak 3) dengan membandingkan dengan masa penyimpanan bahan-bahan piawai, yang ditunjukkan dalam Fig. 1A, dan struktur kimia ditunjukkan dalam Fig. 1B. Seperti yang ditunjukkan dalam Fig. 1C, berat molekul EA (asid ellagic [M – H] -: 301.3) dan PC (punicalagin [M – H] -: 1083.2) dikesan dari spektrum jisim. Kandungan PC dan EA dalam PoPx dikira mengikut persamaan regresi dan kawasan puncak PoPx yang berkaitan. Hasil analisa menunjukkan bahawa PC menyumbang 479.82 mg g-1 dan akaun EA untuk 7.53 mg g-1 dalam ekstrak kulit buah delima (PoPx) . Jadual 1 Julat linear, persamaan regresi dan R2 EA dan PC

Component	Linear range (mg L−1)	Regression equation	R2
EA	50–500	ya = 149530x + 2 × 106	0.9935
PC	125–2000	ya = 2 × 107x − 6 × 106	0.971

a y is the peak area; x refers to the concentration of compound (mg L⁻¹).

Rajah 1 HPLC dan MS. (A) Kromatogram PoPx, PC (puncak 1 dan puncak 2) dan EA (puncak 3). (B) Struktur kimia PC dan EA. (C) Berat molekul EA (asid ellagic [M – H] -: 301.3) dan PC (punicalagin [M – H] -: 1083.2).

Ekstrak kulit buah delima (PoPx) menghalang percambahan dan mempengaruhi morfologi sel-sel kanser tiroid

Untuk menilai kesan ekstrak kulit buah delima (PoPx) pada kanser tiroid, BCPAP dan garis sel TPC-1 digunakan dalam kajian ini. Seperti yang ditunjukkan dalam Fig. 2B, kami menyiasat kesan ekstrak kulit buah delima (PoPx) yang bergantung kepada masa dan tumpuan terhadap sel kanser tiroid dengan mendedahkan sel-sel ke pelbagai kepekatan ekstrak kulit buah delima (PoPx) (0, 12.5, 25, 50, 100 dan 200 μg mL-1) selama 24 h, 48 jam dan 72 jam. Percambahan TPC-1 meningkat dengan rawatan 12.5-50 μg mL-1 ekstrak kulit buah delima (PoPx) selama 24 jam. Walau bagaimanapun, rawatan 100-200 μg mL-1 PoPx jelas menghalang percambahan TPC-1.

Sementara itu, daya tahan sel menurun dengan rawatan 25-200 μg mL-1 ekstrak kulit buah delima (PoPx) selama 48 jam dan rawatan 12.5-200 μg mL-1 PoPx selama 72 jam. Selain itu, kepekatan rendah rawatan ekstrak kulit buah delima (PoPx) selama 24 jam juga tidak menghalang percambahan BCPAP dan hanya dalam kepekatan 200 μg mL-1 dari ekstrak kulit buah delima (PoPx) terdapat percambahan proliferasi yang jelas. Tambahan pula, daya tahan sel menurun dengan rawatan 50-200 μg mL-1 PoPx selama 48 jam dan rawatan 12.5-200 μg mL-1 ekstrak kulit buah delima(PoPx) selama 72 jam di BCPAP. Oleh itu, kami menyimpulkan bahawa kesan anti-tumor ekstrak kulit buah delima(PoPx) tidak stabil pada dos yang lebih rendah dalam masa 24 jam. Konsentrasi dan masa rawatan dadah kedua-duanya mempengaruhi keberkesanan anti-proliferasi dalam sel kanser tiroid. Selepas rawatan dengan ekstrak kulit buah delima (PoPx) selama 48 jam dan 72 jam, percambahan kedua-dua sel BCPAP dan TPC-1 menurun dengan jelas dengan nilai IC50 berkurang dari 110.8 μg mL-1 hingga 76.9 μg mL-1 untuk BCPAP dan daripada 120.8 μg mL- 1 hingga 68.4 μg mL-1 untuk TPC-1. Lebih-lebih lagi, kita mengkaji kesan penghambatan ekstrak kulit buah delima (PoPx) pada tiga saluran sel normal (Nthy-ori 3-1, HEK293 dan LO2), manakala nilai IC50 lebih daripada 400 μg mL-1 (Table 2). Di samping itu, perubahan dalam morfologi sel-sel kanser tiroid diperhatikan selepas 48 jam rawatan dengan ekstrak kulit buah delima (PoPx) (Fig. 2A).

Fig. 2 Penghambatan pertumbuhan sel dan pembentukan koloni pada sel-sel kanser manusia BCPAP dan TPC-1 oleh PoPx.

• (A) Sel didedahkan kepada pelbagai dos PoPx (0-200 μg mL-1) selama 48 jam dan perubahan morfologi sel telah dinilai (× 10).
• (B) Proliferasi BCPAP, TPC-1 dan Nthy-ori 3-1 sel yang dirawat dengan pelbagai kepekatan (0-200 μg mL-1) PoPx selama 24, 48 dan 72 jam, masing-masing. Daya tahan sel telah dinilai oleh ujian MTT. Data dinyatakan sebagai sarana ± SD dari tiga eksperimen (* p <0.05; ** p <0.01; *** p <0.001 vs kawalan kenderaan).
• (C) Kesan PoPx (0-200 μg mL-1) pada pembentukan koloni di BCPAP dan garisan sel TPC-1 selama 10 hari, keputusan statistik pembentukan koloni menunjukkan sebagai koloni yang masih hidup. Data dinyatakan sebagai sarana ± SD dari tiga eksperimen (* p <0.05; ** p <0.01; *** p <0.001 vs kawalan kenderaan).

Untuk selanjutnya mengkaji sama ada ekstrak kulit buah delima (PoPx) dapat menghalang percambahan sel-sel kanser tiroid, kami melakukan ujian pembentukan koloni selepas rawatan ekstrak kulit buah delima (PoPx). Fig. 2C jelas menunjukkan bahawa pembentukan klon BCPAP dan TPC-1 sel telah dikurangkan dengan cara bergantung kepekatan selepas pendedahan kepada ekstrak kulit buah delima (PoPx) . Selain itu, bilangan koloni yang dirawat dengan ekstrak kulit buah delima (PoPx) berkurangan berbanding dengan kawalan. Diambil bersama, hasil ini menunjukkan bahawa ekstrak kulit buah delima (PoPx) mempunyai kesan sitostatic dan sitotoksik kuat pada sel kanser tiroid.

Apoptosis sel induk ekstrak kulit buah delima (PoPx) dalam rangkaian sel BCPAP dan TPC-1

Kami seterusnya mengkaji sama ada ekstrak kulit buah delima (PoPx) mengandaikan apoptosis sel kanser tiroid. Kaedah pewarnaan Hoechst 33258 menunjukkan bahawa rawatan ekstrak kulit buah delima (PoPx) mengakibatkan penguncupan sel, pemecahan nuklear dan pembentukan nukleus pekat dengan pendarfluor biru terang. Juga, perubahan ini bergantung kepada tumpuan (Fig. 3A). Perubahan morfologi juga diperhatikan dalam sel-sel TPC-1 (Fig. 3A).

	Fig. 3

Gambar 3 PoPx menggerakkan apoptosis sel kanser thyriod.

• (A) Perubahan sel-sel nuklear sel BCPAP dan TPC-1 ditentukan oleh pewarnaan dengan Hoechst 33258 dan digambarkan oleh mikroskop pendarfluor selepas rawatan dengan peningkatan dos ekstrak kulit buah delima (PoPx) selama 48 h (× 40)
• (B) Sel BCPAP dan TPC-1 dirawat dengan ekstrak kulit buah delima (PoPx) pada dosis yang dinyatakan selama 48 jam, dan tahap apoptosis dinilai menggunakan teknik dual-lab Annexin V / PI, dan ditentukan oleh FCM.
• (C) Perkadaran sel apoptosis, termasuk sel-sel apoptosis awal (LR, positif untuk Annexin V sahaja) dan sel-sel apoptotik yang lewat (UR, Annexin V dan PI-positif) dianalisis selepas pelbagai kepekatan (0-200 μg mL -1) rawatan PoPx selama 48 jam. Data dinyatakan sebagai cara ± SD dari tiga eksperimen (* p <0.05; ** p <0.01; *** p <0.001 vs kawalan kenderaan).
• (D) Analisis blot Barat sel-sel BCPAP yang dirawat (48 jam) dengan kepekatan yang berbeza (0, 25, 100 dan 200 μg mL-1) ekstrak kulit buah delima (PoPx) digunakan untuk menilai ungkapan protein Bax dan MMP-9. Ekspresi protin dikuantifikasi oleh analisa densitometri menggunakan Gambar J dan dinormalisasi terhadap ekspresi β-actin. Perangkaan ekspresi relatif Bax meningkat dan MMP-9 menurun selepas rawatan dengan PoPx ditunjukkan di sebelah kanan. Data dinyatakan sebagai cara ± SD dari tiga eksperimen (* p <0.05; ** p <0.01; *** p <0.001 vs kawalan kenderaan).

Untuk mengesahkan lagi induksi apoptosis dalam BCPAP dan TPC-1 sel dengan rawatan ekstrak kulit buah delima (PoPx), kami juga memereksa tahap apoptosis menggunakan teknik dual-labeling Annexin V-FITC / PI oleh sitometri aliran (FCM). Seperti yang ditunjukkan dalam Fig. 3B and C,, ekstrak kulit buah delima (PoPx) mengandaikan apoptosis sel BCPAP berdasarkan lepada kepekatan. Selepas 48 jam, peratusan sel apoptosis (sel apoptosis awal ditambah sel apoptosis lewat) meningkat dari 3.49% kepada 38.8% kerana kepekatan meningkat dari 0 hingga 200 μg mL-1, telah menunjukkan perubahan hampir 35.3%.

Keputusan yang sama juga diperhatikan dalam sel TPC-1 dan peratusan sel apoptosis pada kepekatan yang berbeza adalah seperti berikut: kawalan (10.09%), 12.5 μg mL-1 (8.21%), 25 μg mL-1 (12.68%), 50 μg mL-1 (20.29%), 100 μg mL-1 (37.00%) dan 200 μg mL-1 (70.50%). Di samping itu, western blottingjuga mengesahkan pencirian apoptosis yang disebabkan oleh ekstrak kulit buah delima (PoPx). Kami memeriksa tahap Bax expression dalam sel-sel BCPAP selepas rawatan ekstrak kulit buah delima (PoPx) selama 48 jam. Seperti yang ditunjukkan dalam Fig. 3D, ekspresi Bax (sejenis protein pro-apoptosis) meningkat dengan cara yang bergantung kepada kepekatan, yang menunjukkan bahawa ekstrak kulit buah delima (PoPx) dapat mendorong apoptosis sel-sel kanser tiroid.

Ekstrak kulit buah delima (PoPx) sebabkan kehilangan potensi transmisi mitokondria (ΔΨm) dan penjanaan ROS

Dalam data sebelumnya, tahap peningkatan Bax diperhatikan selepas rawatan dengan ekstrak kulit buah delima (PoPx) Fig. 3D. Kami membuat spekulasi bahawa apoptosis yang disebabkan oleh ekstrak kulit buah delima (PoPx) mungkin melalui laluan apoptosis mitokondria. Untuk mengesahkan hipotesis ini, kami menguji perubahan dalam potensi membran mitokondria (ΔΨm) oleh FCM menggunakan fluorochrome hijau Rh123. Seperti yang ditunjukkan dalam Fig. 4A, B and C, rawatan ekstrak kulit buah delima (PoPx) membawa kepada kehilangan ΔΨm dalam BCPAP dan TPC-1 sel. Terutamanya dalam dos 200 μg mL-1, kehilangan ΔΨm dalam BCPAP meningkat dengan ketara kepada 56.13% berbanding dengan kumpulan kawalan selepas pendedahan kepada ekstrak kulit buah delima (PoPx) selama 48 jam.

Hasil yang sama diperhatikan dalam TPC-1 sel. Keputusan ini menunjukkan bahawa jalur mediasi mitokondria mungkin terlibat dalam apoptosis yang disebabkan oleh ekstrak kulit buah delima (PoPx).

Rajah 4 Kesan PoPx melalui laluan apoptosis intrinsik. (A-C) PoPx mengurangkan potensi membran mitokondria (ΔΨm) dalam BCPAP dan TPC-1 sel. Sel BCPAP dan TPC-1 dirawat dengan pelbagai kepekatan (0-200 μg mL-1) PoPx selama 48 jam dan kemudian diwarnai dengan 10 μM Rh123 untuk mengesan perubahan dalam ΔΨm oleh FCM. Data dinyatakan sebagai cara ± SD dari tiga eksperimen (* p <0.05; ** p <0.01; *** p <0.001 vs kawalan kenderaan). Sel BCPAP (D) dan TPC-1 (E) dirawat dengan kepekatan yang ditentukan (0-200 μg mL-1) PoPx selama 48 jam. Sel-sel yang dituai telah dimuatkan dengan 10 μM DCFH-DA dan kemudian ROS di sel-sel diukur oleh FCM. (F) Kuantifikasi ROS ditunjukkan. Data dinyatakan sebagai cara ± SD dari tiga eksperimen (* p <0.05; ** p <0.01; *** p <0.001 vs kumpulan kawalan).

Banyak penyelidikan telah menunjukkan bahawa mitokondria memainkan peranan penting dalam metabolisme sel dan apoptosis dan merupakan sumber utama spesies oksigen reaktif (ROS) . ^36,37 ROS yang berlebihan mendorong peredaran permeabiliti mitokondria (PT) pembukaan liang dan cytochrome c release dari mitokondria, yang menghasilkan dalam penurunan dalam Δψm, pembentukan apoptosome dan pengaktifan caspase.38 Untuk menguji tahap ROS, kami menghidu sel-sel dengan reagen DCFH-DA dan anggaran pengumpulan ROS oleh FCM. Keputusan menunjukkan bahawa tahap ROS meningkat dengan cara yang bergantung kepada dos. Perubahan pada paras ROS meningkat sehingga 2.1 kali dalam sel BCPAP dan sehingga 4.0 kali dalam sel TPC-1 apabila 200 μg mL-1 PoPx ditadbirkan (Fig. 4D–F). Keputusan ini mengesahkan bahawa perencatan sel-sel kanser tiroid oleh PoPx diantara mediasi oleh induksi apoptosis melalui laluan apoptosis yang dimediasi mitokondria.

Ekstrak kulit buah delima (PoPx) menghalang penghijrahan sel kanser tiroid

Kami melakukan ujian migrasi transwell menggunakan talian sel BCPAP dan TPC-1. Seperti yang ditunjukkan dalam Fig. 5A, ekstrak kulit buah delima (PoPx) menghalang migrasi kedua-dua sel BCPAP dan TPC-1 dalam cara yang bergantung kepada dos. Kemudian, kami melakukan ujian pencerobohan Matrigel. Keupayaan pencerobohan kedua-dua sel BCPAP dan TPC-1 berkurangan secara signifikan dengan kehadiran ekstrak kulit buah delima (PoPx) ke atas vehicle itu, yang boleh dilihat secara jelas dalam Fig. 5B..

Rajah 5 ekstrak kulit buah delima (PoPx) menghalang sel-sel kanser thyriod BCPAP dan migrasi TPC-1 dan pencerobohan. (A) ekstrak kulit buah delima (PoPx) menghalang penghijrahan BCPAP dan TPC-1. Sel-sel tumor diturunkan di ruang atas transwell dengan medium serum bebas dan dirawat dengan kenderaan atau kepekatan yang ditentukan (25, 100, 200 μg mL-1) ekstrak kulit buah delima (PoPx). Selepas kira-kira 48 jam, sel-sel yang dipindahkan telah diperbetulkan, berwarna, difoto (× 20) dan kuantiti (* p <0.05, ** p <0.01, *** p <0.001). (B) ekstrak kulit buah delima (PoPx) menghalang serangan BCPAP dan TPC-1. Sel-sel tumor ditanam di mana telah dirawat dengan Matrigel di atas membran ruang atas dan dirawat dengan pelbagai kepekatan (0, 25, 100, 200 μg mL-1) PoPx, dan ruang bawah dipenuhi dengan medium lengkap yang mengandungi 10 % FBS. Selepas kira-kira 48 jam, sel-sel yang diserang telah diperbaiki, berwarna, difoto (× 20) dan dikira (* p <0.05, ** p <0.01, *** p <0.001).

Tambahan pula, mengingat hubungan antara matriks metalloproteinase-9 (MMP-9) dan penghijrahan sel dan pencerobohan, kami menyiasat sama ada MMP-9 terlibat dalam kesan penghambaan terhadap penghijrahan dan pencerobohan PoPx. Seperti ditunjukkan dalam Fig. 3D rawatan ekstrak kulit buah delima (PoPx) menurunkan ungkapan MMP-9 dalam sel-sel BCPAP. Diambil bersama, semua hasil ini menunjukkan bahawa ekstrak kulit buah delima (PoPx) menghalang penghijrahan dan pencerobohan sel-sel kanser tiroid.

Keberkesanan antitumor ekstrak kulit buah delima (PoPx) dalam model xenograft kanser tiroid manusia BCPAP

Untuk menentukan sama ada aktiviti antitumor ekstrak kulit buah delima (PoPx) dalam vivo selaras dengan kesannya dalam vitro, tikus tumor BCPAP diberi setiap hari dengan dos 62.5 mg kg-1 dan 125 mg kg-1 untuk 24 hari sebelum dan selepas inokulasi. Seperti yang ditunjukkan dalam Fig. 6C, jumlah tumor adalah jauh lebih rendah dalam tikus yang dirawat dengan ekstrak kulit buah delima (PoPx) berbanding dengan tikus kawalan. Walau bagaimanapun, sebagai penunjuk kesihatan, berat badan tidak menunjukkan perbezaan yang ketara antara tiga kumpulan ini sepanjang eksperimen (Fig. 6D). Pada akhir eksperimen, tumor telah diasingkan dan ditimbang (Fig. 6A and B). Seperti yang ditunjukkan dalam Fig. 6B, berat tumor min adalah kurang daripada tikus yang dirawat ekstrak kulit buah delima (PoPx) berbanding tikus kawalan.

Untuk mengesahkan mekanisme aktiviti ekstrak kulit buah delima (PoPx) yang mendasari, tumor yang disebabkan oleh BCPAP yang dikumpulkan pada hari ke-31 telah diperiksa untuk percambahan dan apoptosis. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 6E dan F, ekstrak kulit buah delima (PoPx) secara signifikan meningkatkan sel CC-3-positif dan menurunkan sel-sel Ki-67-positif. Di samping itu terdapat peningkatan bukti untuk menunjukkan bahawa MMP mempunyai peranan penting dalam penularan tumor dan metastasis.³⁹ Kami juga mendapati bahawa rawatan dengan ekstrak kulit buah delima (PoPx) dapat menghalang ekspresi MMP-9 dalam jaringan tumor BCPAP (Fig. 6G).

Secara keseluruhan, data ini menunjukkan bahawa ekstrak kulit buah delima (PoPx) menekan tumor tiroid dengan menghalang percambahan sel, mendorong apoptosis, dan menyekat metastasis, yang konsisten dengan data in vitro. Lebih penting lagi, tiada perubahan patologi selepas rawatan ekstrak kulit buah delima (PoPx) diperhatikan pada jantung, hati, limpa, paru-paru dan ginjal oleh pewarnaan H & E (Fig. 7), yang menunjukkan bahawa ini adalah agen yang selamat dan efektif untuk terapi kanser tiroid, sekurang-kurangnya dalam xenograft model tumor.

Fig. 6 Kesan antitumor ekstrak kulit buah delima (PoPx) dalam vivo. (A) Tumor telah divisualisasikan untuk menunjukkan kesan perencatan PoPx pada tumor BCPAP 24 hari selepas implantasi sel ectopic subkutaneus. (B) Mewakili berat tumor dari tikus dari kumpulan yang berbeza. Data dinyatakan sebagai cara ± SD (n = 5; ** p <0.01). (C) Saiz tumor diukur dan dikira setiap tiga hari dan disajikan sebagai cara ± SD (n = 5; * p <0.05, ** p <0.01, *** p <0.001). (D) Perbezaan berat badan antara kedua-dua kumpulan yang dikendalikan dan satu kumpulan kenderaan tidak signifikan. Data dinyatakan sebagai cara ± SD. (E-G) Tumor diperbetulkan dalam formalin, diproses untuk penapisan parafin dan kemudian diwarnai dengan CC-3, Ki-67 dan MMP-9 menggunakan Kit Pengesanan DAB. Imej yang ditunjukkan adalah wakil dari setiap kumpulan (× 20). (E) Apoptosis diukur pada bahagian tumor BCPAP yang terbabit parafin oleh pewarnaan imunohistokimia CC-3. Data statistik nombor sel positif CC-3 ditunjukkan di sebelah kanan. (F) Proliferasi sel tumor dinilai melalui analisis imunohistokimia yang mengotorkan Ki-67, dan data statistik nombor sel positif Ki-67 ditunjukkan di sebelah kanan. (G) Imunohistokimia dilakukan untuk mengukur ungkapan MMP-9 dalam tisu tumor yang terisolasi dari kenderaan dan tikus yang dirawat ekstrak kulit buah delima (PoPx). Rawatan dengan ekstrak kulit buah delima (PoPx)mengurangkan sel MMP-9-positif berbanding dengan kumpulan kenderaan (* p <0.05; ** p <0.01 vs kawalan kenderaan).

Fig. 7 Penilaian kerosakan PoPx kepada organ-organ mendatar haiwan. Tikus dibahagikan kepada 3 kumpulan dan diberikan secara intragastrically (mis.) Dengan PoPx 125 mg kg-1, 62.5 mg kg-1 atau kenderaan. Selepas 31 hari, haiwan itu dimatikan dan organ-organ utama diperolehi untuk kajian lanjut. Pewarnaan H & E bahagian-bahagian parafin hati, hati, limpa, paru-paru dan ginjal ditunjukkan dari tikus tumor BCPAP (× 20)

PERBINCANGAN

Kejadian kanser tiroid telah meningkat pesat di seluruh dunia dalam beberapa tahun kebelakangan ini dan kelaziman di kalangan wanita adalah kira-kira tiga kali ganda daripada lelaki, terutamanya di antara mereka yang berumur 25-65. ² Walaupun kanser tiroid mempunyai prognosis yang agak baik, metastasis nodus limfa serviks dan subset yang agresif sangat dikaitkan dengan risiko berulang atau kematian. ⁵Di samping itu, sebagai rawatan utama untuk kanser tiroid, pembedahan pasti menjejaskan kualiti hidup pesakit dan juga memerlukan petunjuk ketat dan kontraindikasi. ⁶ Oleh itu, perkembangan pendekatan klinikal baru untuk rawatan kanser tiroid adalah penting.

Tumbuhan herba telah menjadi asas bagi hampir semua terapi ubat sepanjang sejarah manusia. ^8,9 Ekstrak tumbuhan telah menarik perhatian besar dalam bidang farmasi dan makanan sejak akhir abad ke-19. Ekstrak semula jadi yang digunakan dalam kajian anti kanser telah dilaporkan berterusan dimana ekstrak kentang membunuh sel-sel stem kanser, ⁴⁰ ekstrak magnolia mengawal kesan anti-kanser, ⁴¹ ekstrak kayu manis menghalang pertumbuhan sel kanser, ⁴² ekstrak ros merawat kanser payudara triple-negatif (ER-, PR-, dan HER2 -). ⁴³ Mengikut keselamatan dan pemakanan mereka, fitokimia merupakan strategi yang menjanjikan untuk menyediakan pendekatan tambahan untuk pencegahan dan rawatan kanser. Pada masa ini, banyak penyelidikan kepada bahagian yang berlainan buah delima telah dilaporkan dan ia diketahui mengandungi aktiviti antioxidant dan antikanser yang sangat besar.^19,20 Oleh itu, kajian kami memberi tumpuan kepada kesan antikanker pada kanser tiroid oleh ekstrak kulit delima (PoPx ). Dalam kajian ini, ekstrak kulit buah delima (PoPx) telah dinilai potensinya terhadap kanser tiroid dalam vitro dan vivo.

Kami pertamanya mengesan kandungan PC dan EA dalam ekstrak kulit buah delima (PoPx), masing-masing ialah 479.82 mg g-1 dan 7.53 mg g-1. Polifenol ini merupakan komposisi utama ekstrak dan memainkan peranan penting dalam aktiviti antikanser.^44,45 Keputusan ujian MTT menunjukkan bahawa ekstrak kulit buah delima (PoPx) menurunkan daya tahan sel-sel kanser tiroid, dan data ujian pembentukan koloni menunjukkan bahawa ekstrak kulit buah delima (PoPx) menghalang perkembangan kanser tiroid sel-sel berdasarkan kepada kadar dos yang diambil.

Selain itu, perubahan morfologi apoptotik klasik telah diperhatikan dalam sel yang dirawat oleh dadah, termasuk pengurangan jumlah sel dan pembentukan morfologi pekeliling; ini tidak dilihat dalam sel-sel kumpulan kawalan. Apoptosis, program pembunuhan sel, mengekalkan tisu homeostasis dan menghilangkan sel-sel yang tidak diingini atau yang rosak dari organisma multiselular, yang merupakan asas bagi perkembangan mereka. ⁴⁶ Baru-baru ini, dengan kajian mendalam mengenai apoptosis sel, saintis telah menyedari bahawa apoptosis adalah mekanisme utama dalam kematian sel tumor. ⁴⁷Kaedah pewarnaan Hoechst 33258 dan pengujian FCM kedua-duanya mendedahkan bahawa rawatan ekstrak kulit buah delima (PoPx) mendorong apoptosis sel-sel kanser tiroid yang bergantung kepada kepekatan.

Terdapat dua jenis utama apoptosis iaitu laluan selular reseptor-mediated kematian sel dan jalur intrinsik yang dimediasi mitokondria. Bax-protein keluarga pro-apoptotik Bax terlibat dalam induksi apoptosis intrinsik. ^48,49 Dalam kajian kami, Bax telah dikawal. Tambahan pula kami mendapati bahawa ekstrak kulit buah delima (PoPx) telah meningkatkan pengeluaran ROS secara signifikan dalam BCPAP dan TPC-1 sel. Ini konsisten dengan hasil pengurangan dos yang bergantung kepada membran potensi mitokondria. Dalam hal ini, ekstrak kulit buah delima (PoPx) boleh mengaktifkan beberapa keputusan laluan isyarat lain dalam apoptosis. Ini perlukan kajian lanjut.

Oleh itu, sebahagiannya, data ini menunjukkan bahawa rawatan ekstrak kulit buah delima (PoPx) yang disebabkan oleh apoptosis dalam kanser tiroid mungkin melalui laluan apoptosis mitochondrial yang dimediasi ROS. Oleh kerana tidak semua sel yang mempunyai aktiviti antitumor yang kuat dalam vitro dapat memperlihatkan aktiviti antikanser dalam vivo, kami memeriksa kesan antitum ekstrak kulit buah delima (PoPx) dalam model tumor BCPAP yang ditanamkan dalam tikus BALB / c athymic. Keputusan menunjukkan bahawa pertumbuhan tumor sangat dihalang oleh ekstrak kulit buah delima (PoPx) (125 mg kg-1 d-1) dengan kadar perencatan pada 69.8%. Sementara itu, peningkatan ekspresi CC-3 dan ekspresi Ki-67 yang dikurangkan dalam tisu tumor diperhatikan selepas rawatan ekstrak kulit buah delima (PoPx) berbanding dengan kumpulan yang tidak dirawat.

Kanser tiroid bermula sebagai penyakit setempat, tetapi ia juga boleh merebak ke nodus limfa, paru-paru dan organ lain. ⁵⁰ Proses metastatik adalah kompleks yang mana sel-sel tumor perlu masuk ke dalam darah atau saluran limfa serta memenularkan ke organ-organ sekunder. Oleh itu, migrasi sel tumor dan pencerobohan merupakan langkah penting dalam metastasis kanser yang berjaya, sehingga menghalang langkah ini adalah pendekatan praktikal untuk rawatan anti-metastasis.

Telah dilaporkan bahawa saluran pernafasan kinase (FAK) / MMP yang terlibat adalah penting untuk pencegahan kanser dan metastasis. ⁵¹ MMP-9 up-regulasi dapat meningkatkan potensi metastasis sel tumor dalam kanser tiroid. ⁵²Dalam kajian ini, ekstrak kulit buah delima (PoPx) turun Pengasingan MMP-9 di dalam sel-sel BCPAP dan tisu tumor. Keputusan menunjukkan bahawa ekstrak kulit buah delima (PoPx) boleh menghalang metastasis kanser tiroid dengan menghalang isyarat MMP.

Penghargaan

Penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada Chen Fan atas bantuan teknikalnya. Kajian ini dibiayai oleh National Natural Science Foundation of China (81500054 and 81402564), China Postdoctoral Science Foundation (2015M570788 and 2016T90859), Technology Department of Sichuan Province (2014SZ0170 and 2015SZ0174).

Journal Penyelidikan ini dihasilkan oleh:  Yujue Li†a, Tinghong Ye†b, Fangfang Yang†b, Mingxing Hub, Libo Lianga, He Hec, Zhipeng Lia, Anqi Zengb, Yali Lib, Yuqin Yaob, Yongmei Xieb, Zhenmei An*a and Shuangqing Li*a a

Department of Endocrinology and Metabolism, Department of General Practice Medicine, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu, China. E-mail: lsqhxjk@126.com; anzm1997@sina.com;;

Fax: +86 28 85164060; Tel: +86 28 85503817 b State Key Laboratory of Biotherapy and Department of Liver Surgery, West China Hospital, Sichuan University and Collaborative Innovation Center for Biotherapy, Chengdu, China c Department of Laboratory Medicine, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu, China

Sumber asal artikel: http://pubs.rsc.org/en/content/articlehtml/2016/RA/C6RA13167K

Nota: Klik nombor untuk lihat sumber rujukan